Šūnu iezīmēšana ar fluorescējošām iezīmēm

Uzdevumi:
Iezīmēt cilvēkas dermas šūnas ar fluorescējošām iezīmēm.
Uzņemt 10x un 40x attēlus ar fluorescento mikroskopu.
10x attēlā saskaitīt šūnas izmantojot manuālo un automātisko skaitīšanu ImageJ programmā (skat. ImageJ protokolu e-studijās)
Noteikt iezīmes intensitāti kodolos.

Šūnu iezīmēšana ar Hoechst un Phalloidin-488.
1.) Ar Pastēra pipeti atsūc no šūnām PBS buferšķīdumu (Phosphate Buffered Saline). Mēģina ar pipeti nepieskarties stiklinam.
2.) Uz 5-7 minūtēm šūnām uzpilina permeabilizācijas šķīdumu – 2-3 pilieni 0.1% TritonX-100
3.) Atsūc permeabilizācijas šķīdumu
4.) Mazgā 2x ar PBS – piepilina 2-3 pilienus PBS un atsūc to.
5.) Šūnām pievienio sagatavoto iezīmēšanas šķīdumu, kas satur Hoechst un Phalloidin.
6.) Inkubē tumšā vietā istabas temperatūrā 30-40 minūtes
7.) Atsūc iezīmēšanas šķīdumu.…